Sigma試劑：藥典重組胰蛋白酶,T5266-500MG

Sigma試劑：藥典重組胰蛋白酶,T5266-500MG,CAS: 9002-07-7

屬性：

生物來源：Porcine pancreas

質量水平：200

無菌性：γ-irradiated

產品線：BioXtra

形式：lyophilized powder

specific activity：1,000-2,000 BAEE units/mg solid

分子量：23.8 kDa

濃度：25 mg/mL

應用：cell culture | mammalian: suitable

運輸：wet ice

儲存溫度：2-8°C

應用：

對于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶:肽的使用比例約為1:100至1:20。本品的典型用途是使貼壁細胞從培養表面脫落。 使細胞解離所需的胰蛋白酶濃度主要取決于細胞類型和培養物代數。 Trypsins也被用于細胞培養過程中的細胞再懸浮，在蛋白質組學研究中用于蛋白質的消化，以及在各種凝膠消化中。 其他的應用包括通過基于膜的技術評估結晶，以及在一項研究中確定蛋白質折疊速率和產量可以被動力學陷阱的存在所限制。

生化/生理作用：

胰蛋白酶可切割賴氨酸和精氨酸殘基的C末端肽段。 如果酸性殘基位于切割位點的任意一側，則該反應的水解速度減慢，并且如果脯氨酸殘基位于切割位點的羧基側，則水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH條件為7-9。 胰蛋白酶還可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺鍵。 將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑，用于中和鈣離子和鎂離子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除這些離子會增加酶活性。

絲氨酸蛋白酶抑制劑（包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等）會抑制胰蛋白酶。

組分：

胰蛋白酶由 223 個氨基酸殘基的單鏈多肽組成，通過去除胰蛋白酶原的 N-末端六肽而產生，胰蛋白酶原在Lys-1le肽鍵處被切割。氨基酸序列由 6 個二硫鍵交聯。這是胰蛋白酶、β-胰蛋白酶的天然形式。β-胰蛋白酶可自水解，在賴氨酸殘基處裂解，生成 α-胰蛋白酶。胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶家族的一員。

注意：

1 mM HCl 溶液等分試樣可在-20°C 條件下穩定儲存 1 年。Ca 2 + 的存在也會減弱胰蛋白酶的自溶并維持其在溶液中的穩定性。胰蛋白酶在 2.0 M 尿素、2.0 M 鹽酸胍或 0.1% (w/v) SDS 中也將保留大部分活性。

單位定義：

一個BAEE單位以BAEE作為底物，在25°C、pH 7.6條件下每分鐘每毫升產生0.001的ΔA253 。一個BTEE單位=320個ATEE單位。反應體積=3.2mL（1cm的光徑）。

制備說明

本品為凍干粉末，可以25 mg/mL的濃度溶于漢克的平衡鹽溶液。
對于涉及 EDTA 的應用，應使用不含 Ca 2 + 或 Mg 2 + 的緩沖鹽溶液溶解胰蛋白酶。

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