Sigma試劑:胰蛋白酶-EDTA,T4049-100ML
屬性:
生物來源:Porcine
質量水平:400
無菌性:sterile-filtered
產品線:BioReagent
形式:solution
分子量:23.4 kDa
濃度:0.25%
應用:cell culture | mammalian: suitable
雜質:Porcine parvovirus, none detected (9 CFR)
pH值(酸堿度):7.0-7.6
運輸:dry ice
儲存溫度:?20°C
應用:
胰蛋白酶-EDTA溶液已用于:
在高濃度樣品的相對細胞頻率測定期間,將在補充了10%胎牛血清的RPMI 1640中培養的HT29人結直腸癌細胞進行分離。
胰蛋白酶消化瞬時轉染的人胚腎tcA-201細胞系
在細胞培養期間酶促釋放粘附于支架的小鼠成纖維細胞(L929細胞系),以評估幾種改性處理對聚(L/D)丙交酯96/4非織造支架和纖維的影響。
該產品的常見用途在于將貼壁細胞從培養基表面移除。 將細胞從基底上分離所需的胰蛋白酶濃度主要依賴于細胞類型和培養基已使用的時間。
生化/生理作用:
胰蛋白酶可切割賴氨酸和精氨酸殘基的C末端肽段。 如果酸性殘基位于切割位點的任意一側,則該反應的水解速度減慢,并且如果脯氨酸殘基位于切割位點的羧基側,則水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH條件為7-9。 胰蛋白酶還可以切割氨基酸合成衍生物的酯和酰胺鍵。 將EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作為螯合劑,用于中和鈣離子和鎂離子以防止其抑制胰蛋白酶活性。 去除這些離子會增加酶活性。
絲氨酸蛋白酶抑制劑(包括DFP、TLCK、APMSF、AEBSEF和抑肽酶等)會抑制胰蛋白酶。
組分:
胰蛋白酶是由223個氨基酸殘基的單鏈多肽所組成,通過從胰蛋白酶原在Lys - lle肽鍵處被切割去除N末端六肽而產生。 氨基酸序列通過6個二硫鍵交聯。 這是天然形式的胰蛋白酶——β-胰蛋白酶。 β-胰蛋白酶可以自溶,在Lys-Ser殘基處斷裂,產生α-胰蛋白酶。 胰蛋白酶是絲氨酸蛋白酶家族的成員。
注意:
本品應置于-10至-40°C環境冷凍儲存。避免反復凍融。
制備說明:
該產品中含有酚紅。 由于該產品通過干冰進行運輸,所以在包裝中會有顯著的二氧化碳累積。 這些CO2可能會進入到溶液并略微降低pH,從而產生橙色而非淡粉色的顏色。 這種橙色的溶液依然適合使用,或者也可利用氫氧化鈉對pH進行調整。 用過高濃度的胰蛋白酶對細胞進行過長時間的孵育可造成細胞膜的損傷并殺死細胞。 將胰蛋白酶溶解或將其從濃縮液進行稀釋應采用不含有Ca2+或Mg2+的緩沖鹽溶液。
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