血清的質量對實驗成敗起著關鍵性作用,但血清使用不當也可能會導致血清質量下降,造成細胞培養效果不理想。來自新西蘭的進口
胎牛血清很珍貴,大家在血清使用時怎樣確定血清使用濃度?
這個只能通過測試了。原則上血清添加量不要太多,通常分為5%、10%、20%幾檔。部分細胞原代提取時會使用20%血清,大部分細胞正常培養時會使用5%~10%的血清濃度。至于某一株細胞適應什么樣的血清濃度,還需要根據細胞特性、實驗目的做測試和調整。
血清使用前需要離心嗎?這個問題有以下兩種可能:
其一,因為血清融解后有“絮狀物”析出。
如果沒有出現其他異常情況,或者血清只是用于細胞培養,那么*沒有必要離心去除。我們知道血清析出的“絮狀物”主要是血纖蛋白,其在血清中含量很高,而且高度不溶,在血清凍融過程中很容易析出,但它也是*無害的,甚至能促進細胞生長。
另外,它還增強了胎牛血清的黏性,為細胞提供了額外的機械緩沖。在其析出過程中,會粘附培養體系中其他成分,離心去除,反而會損失營養成分。
其二,實驗要求純凈的培養體系。
培養的細胞需要進一步鑒定,如免疫熒光、流式、共聚焦拍照等,細胞表面如果有黏性較強的血纖蛋白,勢必會影響效果。
那么,建議400g離心5min即可。如果需要進行精密實驗,如分離外泌體等,那么就需要至少100000g離心1.5h以上。