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做ELISA實驗，這些技巧少不了！
發布時間： 2022-04-26 點擊次數： 1226次做ELISA實驗，這些技巧少不了！
介紹：
ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。
Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
特點：
1.高效、靈敏、特異的抗體。
2.穩定的重復性和可靠性。
3.吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體。
4.適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等多種標本類型。
5.節省實驗經費。
操作方法：
1.標準品的稀釋，請按照說明書進行操作。
2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
3. 加樣：不規范的移液操作可能帶來誤差。
（1）空白孔，空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗NE抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；
（2）標準品孔：加入標準品50ul，鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加)；
（3）待測樣品孔：加入樣本40ul，然后各加入抗NE抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul，蓋上封板膜，輕輕震蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑A50ul，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
7. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8. 測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后10分鐘以內進行。
9. 根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。
洗板方法：
一、手工洗板方法：
甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。
二、自動洗板：
如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。
注意事項：
1.從2-8℃取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。
3.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
4.為避免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
5.不同批次試劑盒不能混用，如遇試劑不夠，請及時聯系客服解決
6.底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
7.中、英文說明書或許會有不一致之處，請以英文說明書為準。
8.保存溫度：2-8℃。
9.有效期：6個月(2-8℃)。
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